組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑he
適用于從動(dòng)物組織、培養(yǎng)細(xì)胞中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA。 本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等 有毒試劑，也無需進(jìn)行耗時(shí)的醇類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA，無蛋白、核酸酶污染，可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑he
FlashPure Tissue/Cell Genomic DNA Kit
動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組 DNA 提取試劑he
（離心柱型）
組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑he
目錄號(hào):40017
產(chǎn)品內(nèi)容：
產(chǎn)品成份 | 40017－50（50次） | 40017－100（100次） |
平衡液 | 5ml | 10ml |
裂解液TL | 11ml | 20ml |
結(jié)合液CB | 11ml | 20ml |
抑制物去除液IR | 25ml | 50ml |
漂洗液WB | 13ml | 25ml |
洗脫緩沖液EB | 10ml | 15ml |
蛋白酶K溶液 | 1ml | 2x1ml |
DNA吸附柱和收集管 | 50套 | 100套 |
自備試劑:
無水乙醇，RNase A（可選）
保存條件:
室溫（15~25℃）
蛋白酶K，室溫可保存 6 個(gè)月，4℃保存 12 個(gè)月，- 20℃保存 2 年。
產(chǎn)品簡介:
適用于從動(dòng)物組織、培養(yǎng)細(xì)胞中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA。
本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等有毒試劑，也無需進(jìn)行耗時(shí)的醇類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA，無蛋白、核酸酶污染，可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 簡便快速：30 min內(nèi)可獲得高純度的基因組DNA。
2. 安全無毒：無需苯fen/氯仿抽提。
3. 高純：OD260/280=1.7～1.9，長度可達(dá)30～50kb，可直接進(jìn)行 PCR、酶切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng):
1. 如果裂解液TL、結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴 溶解，搖勻后使用。
2. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>
3. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游 酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。
操作步驟:
第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液 WB 中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標(biāo)簽。
提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。
1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl平衡液，12,000rpm離心1min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過的柱子）
2. 材料處理：
a. 動(dòng)物組織
將動(dòng)物組織在液氮中研磨成細(xì)粉（或者用解剖dao切成小碎塊），取約 25mg轉(zhuǎn)入1.5ml離心管中，加入180μl裂解液TL，再加入20μl蛋白酶K溶液，振蕩至che底懸浮，56℃水浴1~3小時(shí)，直至組織wan全消化溶解。
推薦樣本投入量：動(dòng)物組織≤25 mg，動(dòng)物脾臟≤10 mg。
鼠尾樣本投入量：大鼠尾巴最大用量為0.6 cm長片段，小鼠鼠尾巴最大用量為1.2cm長片段，并將裂解時(shí)間延長至6-8小時(shí)。
注意：水浴過程中，每10分鐘顛倒混勻一次，可促進(jìn)細(xì)胞裂解。
b. 培養(yǎng)細(xì)胞
① 105~ 106懸浮細(xì)胞到一個(gè) 1.5 ml 離心管；對(duì)于貼壁細(xì)胞，應(yīng)該先 用胰蛋白mei消化后吹打下來收集。
② 13,000rpm離心10sec，吸棄上清，留下細(xì)胞團(tuán)和大約 10~20μl 殘留的液體。
③ 加入200μl 1× PBS，振蕩至細(xì)胞充分懸浮，洗滌細(xì)胞去除雜質(zhì)，13,000rpm離心10sec，wan全吸棄上清。
④ 再次加入 180 μl 1× PBS，振蕩混勻，使細(xì)胞che底懸浮。
⑤ 加入20μl蛋白酶K溶液，充分混勻。
3. （可選步驟）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振蕩混勻，室溫 放置5~10min。
4. 加入200 μl結(jié)合液 CB，充分振蕩混勻，70℃水浴或金屬浴處理10 min。
5. 冷卻后加100μl無水乙醇 (或異丙醇)，充分振蕩混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。
6. 將所得溶液和絮狀沉淀加入一個(gè) DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm離心1min，DNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。
7. 加入500μl抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。
8. 加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)檢查是否已加入無水乙醇），13, 000rpm離心30sec，倒棄濾液。
9. 重復(fù)步驟 9 一遍。
10. 將DNA吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 離心 2 min，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
11. 取出DNA吸附柱，放入一個(gè)干凈的1.5ml離心管中，向吸附膜的中央加入100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在80 ~ 100℃水浴中預(yù)熱可以提高產(chǎn)量），室溫放置3~5min，13,000rpm離心1min。
12. DNA可以存放在2~ 8℃，如果要長時(shí)間存放，可以放置在-20℃。
相關(guān)產(chǎn)品：
50110-500 10000x GenGreen（同GelGreen）無毒核酸染料 藍(lán)光切膠儀用
50111-500 10000x GenRed（同GelRed）無毒核酸染料 凝膠成像儀用
71800-05 2x Lightning Taq PCR MasterMix（含染料） 延伸速度：6 kb/min
71517-05 2x KOD PCR MasterMix（含染料） 擴(kuò)增長度≤6kb 6 kb/min
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